【核心結論】

等溫PCR儀是一種在恒定溫度下完成核酸擴增與熒光實時檢測的分子檢測設備，它擺脫了傳統PCR反復升降溫的復雜熱循環模式，將檢測時間從1.5-2小時縮短至30分鐘以內。優云譜YP-R16系列等溫PCR儀采用LED光源+SiPMT檢測器光學系統，具備單拷貝級靈敏度和10個數量級動態范圍，配合7英寸觸摸屏獨立運行、藍牙遠程操控等智能化設計，將操作門檻降至最低。本文從工作原理、操作流程到維護保養，為您呈現一份完整的等溫PCR儀使用科普指南。

一、等溫PCR儀是什么？——從原理到優勢

1.1 什么是等溫PCR？

PCR（聚合酶鏈式反應）是體外擴增特定DNA片段的分子生物學技術。傳統PCR通過反復升降溫（變性95℃→退火55-65℃→延伸72℃）完成擴增循環，每個循環約需1-2分鐘，重復30-40個循環，總耗時1.5-2小時。

等溫PCR則采用具有鏈置換功能的聚合酶，在單一恒定溫度（通常60-65℃）下同時完成引物退火和鏈延伸，無需任何溫度變化即可實現核酸的指數擴增。將等溫擴增技術與實時熒光檢測技術結合，便構成了等溫PCR儀——擴增與檢測同步進行，反應結束即出結果。

1.2 等溫PCR儀的核心優勢

1.3 等溫PCR儀能檢測什么？

等溫PCR儀可對病毒、細菌、真菌等微生物的核酸進行快速定性定量檢測，廣泛應用于：

病原體檢測：流感病毒、腸道病毒、呼吸道病原體等

動物疫病檢測：非洲豬瘟、口蹄疫等

食品安全檢測：食源性致病菌、肉制品摻假、轉基因成分

基因表達分析：mRNA表達量測定、信號通路研究

水體監測：飲用水源病原微生物檢測

二、檢測前準備

2.1 環境要求

2.2 儀器開機與預熱

YP-R16-2 / YP-R16-4（PC軟件操作）：

連接電源線，按下電源開關

打開配套PC軟件，等待儀器與軟件建立通信連接

建議預熱10分鐘，使光源和傳感器達到穩定工作溫度

YP-R16-6（觸摸屏獨立運行）：

連接電源線，按下電源開關

等待系統啟動（約30秒），進入Android主界面

點擊屏幕自檢功能，確認各通道狀態正常

預熱10分鐘，確保檢測基線穩定

2.3 試劑與耗材準備

試劑準備：檢查等溫擴增試劑盒是否在有效期內，嚴禁使用過期試劑。試劑從冷藏取出后需在室溫平衡15-20分鐘，使用前渦旋混勻并短暫離心。

耗材準備：使用0.1mL透明8排管或0.1mL透明單管，確保管壁光滑無劃痕。推薦使用無DNase/RNase認證的耗材，避免核酸降解。

樣本準備：待測樣本核酸提取完成后，按試劑盒說明書進行梯度稀釋（如需要）。建議設置陽性對照、陰性對照和內參對照，確保結果可靠。

三、標準操作流程

3.1 操作流程（YP-R16-2 / YP-R16-4，PC軟件操作）

第一步：新建實驗

打開PC軟件，點擊『新建實驗』，輸入實驗名稱、操作者、日期等基本信息；選擇檢測通道（FAM/VIC/SYBR Green等）及對應染料。

第二步：設置反應參數

輸入恒溫擴增溫度（通常60-65℃，具體按試劑盒說明書）和反應時間（一般30分鐘）；設置熒光采集頻率（建議每30秒采集一次）；可選擇是否開啟熔解曲線分析功能（用于驗證擴增產物特異性）。

第三步：加樣與放管

將PCR反應體系分裝至0.1mL透明8排管或單管（樣本體積10-50μL）；蓋緊管蓋，檢查無漏液；將8排管/單管放入儀器樣本槽，確保緊貼加熱塊底部。

第四步：啟動運行

點擊『開始運行』，儀器自動進入恒溫擴增程序，實時擴增曲線開始繪制。運行過程中勿打開儀器蓋，避免溫控波動和光學干擾。

第五步：結果判讀

實驗結束后，軟件自動計算各樣本出峰時間或Ct值；陽性/陰性結果自動判定，擴增曲線和原始數據可導出保存。

3.2 操作流程（YP-R16-6，觸摸屏獨立運行）

第一步：新建實驗

在7英寸觸摸屏主界面點擊『新建實驗』，選擇實驗類型（定性檢測/定量分析）；輸入樣本編號和檢測項目信息。

第二步：設置反應參數

通過觸摸屏設置擴增溫度和反應時間；選擇熒光通道（FAM/VIC/SYBR Green等），系統自動匹配對應的激發/發射波長。

第三步：加樣與放管

按前述方法完成加樣，將8排管/單管放入樣本槽。

第四步：啟動運行

點擊屏幕『開始運行』按鈕，實時擴增曲線在屏幕動態顯示。

第五步：結果判讀

運行結束后，系統自動判讀結果，陽性/陰性/無效結果在屏幕清晰標示；支持生成PDF格式檢測報告，通過USB導出或WiFi打印。

3.3 藍牙連接操作（YP-R16-4專屬功能）

YP-R16-4支持藍牙無線連接，特別適合在生物安全柜內操作：

將儀器放置于生物安全柜內合適位置

開啟儀器藍牙功能，與外部電腦配對連接

在安全柜外通過PC軟件完成實驗設置和實時監控

全程無需USB線纜穿過安全柜窗口，保持安全柜密封完整性

3.4 操作注意事項

加樣規范：使用帶濾芯移液槍頭，避免交叉污染；樣本和試劑加樣時避免產生氣泡，氣泡會干擾熒光信號采集。

管蓋密封：確保8排管或單管蓋緊，防止反應體系蒸發導致結果偏差。

避免光干擾：運行過程中避免強光直射儀器光學窗口，以免影響熒光信號采集。

生物安全：處理感染性樣本時，加樣和開蓋操作需在生物安全柜內完成，廢液和耗材按生物廢棄物規范處理。

四、數據分析與結果解讀

4.1 擴增曲線解讀

等溫PCR儀的輸出結果是實時擴增曲線——橫坐標為時間，縱坐標為熒光強度。

陽性樣本：擴增曲線呈典型的S型或指數上升形態，出峰時間與樣本中靶標核酸濃度成反比（濃度越高，出峰越早）。

陰性樣本：擴增曲線平坦，無指數上升，熒光信號始終處于基線水平。

無效結果：陽性對照無信號或陰性對照出現信號，說明實驗體系存在問題，需重新檢測。

4.2 結果判讀標準

4.3 數據導出方式

優云譜YP-R16系列等溫PCR儀支持以下數據導出方式：

原始數據導出：以表格形式導出原始檢測結果、Ct值、熒光信號值等

擴增曲線導出：以圖片格式（PNG/JPG）導出擴增曲線圖

檢測報告生成：YP-R16-6支持PDF格式報告一鍵導出

USB存儲導出：連接USB存儲設備，直接導出Excel或PDF文件

五、日常維護與保養

5.1 每次實驗后

5.2 每周維護

散熱孔清潔：檢查儀器背面和側面散熱孔是否積灰，用小毛刷或吸塵器清除灰塵

電源線檢查：檢查電源線插頭是否松動，USB/藍牙連接是否正常

時間校準：檢查儀器系統時間/日期是否準確（YP-R16-6在系統設置中校準）

5.3 每月維護

5.4 長期停用保管

若儀器預計停用30天以上：

清潔樣本槽和光學窗口，確保無樣本殘留

取出所有耗材，關閉電源并斷開電源線

用防塵套覆蓋儀器，存放于溫度-20~55℃、濕度20%~80%的干燥環境

重新啟用前，先開機預熱15分鐘，運行一次空白程序檢查儀器狀態

六、常見故障排查與處理

七、型號選型快速指引

八、優云譜品牌實力與服務體系

企業概況

山東優云譜光電科技有限公司是專業科學儀器制造商，主營業務涵蓋研發、生產和銷售應用于農業生態、食品快檢、水質檢測、分子生物、實驗室前處理等領域的儀器設備。公司將光電技術與AI技術和云服務深度融合，為農業、林業、科研、畜牧、氣象、水利、食藥、環境等領域提供綜合解決方案。

資質認證

榮獲多項國家證書

通過ISO 9001質量管理體系認證

獲得CNAS校準證書

通過中國計量院校準