實(shí)時(shí)熒光定量PCR設(shè)備的結(jié)果，取決于溫度控制與熒光采集是否穩(wěn)定。校準(zhǔn)與期間核查的作用，就是把"設(shè)備今天的表現(xiàn)與之前是否一致"這件事變成可驗(yàn)證的流程。本文給出真假肉檢測(cè)儀的校準(zhǔn)思路與期間核查要點(diǎn)，供實(shí)驗(yàn)室建立日常質(zhì)量管理時(shí)參考。

一、為什么PCR設(shè)備更需要校準(zhǔn)與核查

PCR反應(yīng)的擴(kuò)增效率對(duì)溫度非常敏感，溫度條件發(fā)生微小變化，就可能影響擴(kuò)增曲線的高度與位置。設(shè)備長(zhǎng)期使用后，溫控模塊與光學(xué)通路都可能出現(xiàn)緩慢變化，若不加以監(jiān)控，不同時(shí)期的數(shù)據(jù)之間就會(huì)出現(xiàn)難以解釋的偏差。

校準(zhǔn)解決的是設(shè)備本身是否處于正常狀態(tài)，期間核查解決的是兩次校準(zhǔn)之間設(shè)備是否發(fā)生漂移。兩者結(jié)合，才能形成完整的狀態(tài)監(jiān)控鏈條，讓檢測(cè)結(jié)果在時(shí)間上保持可比。

二、校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備

校準(zhǔn)前應(yīng)完成三項(xiàng)準(zhǔn)備：清潔反應(yīng)倉(cāng)與光學(xué)窗口，確保無(wú)灰塵與殘留物；確認(rèn)環(huán)境溫度處于規(guī)定范圍，避免環(huán)境因素干擾溫控表現(xiàn)；準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)溫度驗(yàn)證件與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，用于溫度與信號(hào)兩方面的核查。

建議把校準(zhǔn)時(shí)的環(huán)境條件記錄下來(lái)，包括時(shí)間、地點(diǎn)與大致溫濕度，便于后續(xù)追溯。記錄的價(jià)值在于，當(dāng)結(jié)果出現(xiàn)異常時(shí)，可以據(jù)此判斷是否與環(huán)境變化有關(guān)。

此外，校準(zhǔn)應(yīng)盡量在接近日常使用的條件下進(jìn)行。若校準(zhǔn)時(shí)的環(huán)境與日常檢測(cè)環(huán)境差異較大，校準(zhǔn)結(jié)果的實(shí)際參考價(jià)值會(huì)有所降低。

三、溫度校準(zhǔn)步驟

步驟一，將標(biāo)準(zhǔn)溫度驗(yàn)證件置于反應(yīng)倉(cāng)的規(guī)定孔位，按設(shè)定的溫度程序運(yùn)行；步驟二，記錄驗(yàn)證件在各溫度點(diǎn)的實(shí)測(cè)值，與設(shè)定值比較，判斷偏差是否在允許范圍內(nèi)；步驟三，核對(duì)控溫精度、溫度準(zhǔn)確度與溫度均勻性三項(xiàng)指標(biāo)，其中均勻性可在不同孔位同時(shí)放置驗(yàn)證件來(lái)評(píng)估；步驟四，記錄本次校準(zhǔn)結(jié)果并與歷史數(shù)據(jù)比對(duì)。

溫度均勻性是同批樣品結(jié)果一致性的基礎(chǔ)。若不同孔位之間溫差較大，同一批樣品的擴(kuò)增曲線就可能出現(xiàn)位置差異，影響判讀。因此均勻性核查值得單獨(dú)關(guān)注。

四、光學(xué)與熒光校準(zhǔn)

光學(xué)部分的校準(zhǔn)，通常借助已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品來(lái)完成。在相同條件下檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品，比較其擴(kuò)增曲線的起峰位置與熒光強(qiáng)度，若與歷史記錄存在系統(tǒng)性偏移，則應(yīng)檢查光學(xué)通路是否污染，或熒光本底調(diào)節(jié)是否正常。

多通道型號(hào)還應(yīng)檢查各通道之間的信號(hào)一致性。可采用同一染料在多個(gè)通道中的表現(xiàn)做比對(duì)，判斷是否存在通道間干擾。獨(dú)立熒光通道的設(shè)計(jì)有助于減小串?dāng)_，但日常核查仍不可省略。

五、期間核查的要點(diǎn)

期間核查不必像校準(zhǔn)那樣完整，但需要具備可比性。建議采用固定的標(biāo)準(zhǔn)樣品：每次核查檢測(cè)同一濃度的樣品，把結(jié)果與初始記錄并列比對(duì)，觀察是否出現(xiàn)系統(tǒng)性偏移。

核查頻次可根據(jù)使用強(qiáng)度確定。檢測(cè)任務(wù)密集的實(shí)驗(yàn)室，建議每月安排一次；使用頻次較低的場(chǎng)景，可按季度安排。把核查安排在重要檢測(cè)任務(wù)之前，能夠提前確認(rèn)設(shè)備處于可用狀態(tài)。

如果期間核查發(fā)現(xiàn)明顯偏移，應(yīng)暫停使用并查找原因，而不是在設(shè)備狀態(tài)不確定的情況下繼續(xù)出具數(shù)據(jù)。

此外，把期間核查的結(jié)果與歷史記錄繪制成趨勢(shì)圖，能夠更直觀地看出設(shè)備狀態(tài)的變化方向，為是否需要重新校準(zhǔn)提供依據(jù)。

六、判定與處置規(guī)則

七、記錄與證據(jù)鏈

校準(zhǔn)與核查的價(jià)值，很大程度上體現(xiàn)在記錄上。建議建立專門(mén)臺(tái)賬，記錄每次校準(zhǔn)的時(shí)間、執(zhí)行人、環(huán)境條件、所用標(biāo)準(zhǔn)樣品批號(hào)與結(jié)果判定。這些記錄在數(shù)據(jù)被質(zhì)疑時(shí)，能夠作為設(shè)備狀態(tài)的有效證明。

對(duì)于參與科研項(xiàng)目或?qū)ν獬鼍邫z測(cè)數(shù)據(jù)的單位，把校準(zhǔn)與核查記錄與原始檢測(cè)數(shù)據(jù)一并歸檔，是質(zhì)量管理中不可缺少的一環(huán)。完整的證據(jù)鏈不僅服務(wù)于內(nèi)部質(zhì)量控制，也能在外部審核時(shí)減少溝通成本。

山東優(yōu)云譜光電科技有限公司是高新技術(shù)企業(yè)（證書(shū)編號(hào) GR202537003143），通過(guò) ISO9001 質(zhì)量管理體系認(rèn)證（編號(hào) 78323Q0302R0S），并獲評(píng) 3A 級(jí)信用企業(yè)（編號(hào) HYJC-202303690XW02）。公司研發(fā)團(tuán)隊(duì) 80 余人，累計(jì)專利 120 項(xiàng)，售后網(wǎng)點(diǎn) 260 個(gè)，產(chǎn)品質(zhì)保 12 個(gè)月并提供終身技術(shù)支持。